HpSlyD調控TCTP促進CDX2和VIL1表達誘導胃粘膜腸化生作用的研究.pdf

1、目的:幽門螺桿菌是致胃腸化生(gastric intestinal metaplasia，GIM)最重要的危險因素之一。我們先前的研究表明HpslyD陽性菌株感染與GIM相關。本研究擬從體、內外不同層面探討HpSlyD是否可以促進GIM相關因子CDX2和VIL1表達;探討HpSlyD誘導CDX2和VIL1表達過程中TCTP的調控作用，旨在明確HpSlyD誘導GIM發生可能的信號通路。
　　研究方法:1、利用200ng/ml濃度Hp

2、SlyD作用AGS及N87細胞系，提取細胞總RNA和蛋白質。采用實時定量熒光-聚合酶鏈反應(Real-time PCR)以及蛋白質免疫印跡(Western blot)檢測CDX2及VIL1在HpSlyD作用前后表達的變化。2、利用Western blot方法檢測TCTP蛋白在上述HpSlyD作用細胞系及AGS-HpslyD-GFP穩轉細胞系的表達情況;構建TCTP-siRNA，建立瞬時低表達TCTP的AGS、N87細胞系及AGS-Hps

3、lyD-GFP穩轉細胞系，Western Blot檢測在TCTP低表達前后CDX2和VIL1的表達情況;同時，構建TCTP過表達質粒（pCMV6-AC-GFP），建立瞬時高表達TCTP的AGS和N87細胞系，Weatern Blot檢測在TCTP高表達前后CDX2和VIL1的表達情況。3、利用HpSlyD抑制劑FK506預處理細胞系AGS、N87及AGS-HpSlyD-GFP穩轉細胞系，Real-time PCR及Western blo

4、t比較預處理前后細胞CDX2，VIL1及TCTP表達的變化。4、選取胃鏡活檢淺表性胃炎、腸化型萎縮性胃炎以及胃癌患者胃粘膜石蠟包埋組織標本，提取石蠟包埋組織DNA，PCR方法擴增H.pylori保守基因（16s rRNA、glm M等）。在H.pylori陽性人群中，利用PCR方法擴增HpslyD基因保守區。利用免疫組化方法檢測組織標本中CDX2和TCTP的表達情況。在各種疾病中，比較H.pylori陽性和H.pylori陰性組間及Hp

5、slyD陽性和HpslyD陰性組間上述指標蛋白表達的差異;在HpslyD陽性組中，比較不同疾病組間CDX2和TCTP蛋白表達的差異;同時探討在不同H.pylori感染狀態下TCTP和CDX2表達的相關性.5、統計分析采用SPSS16.0軟件，體外實驗均重復三次，結果用(x)±SD表示，采用兩獨立樣本t檢驗，體內實驗采用非參檢驗或者雙側卡方檢驗。
　　結果:1、HpSlyD能夠誘導人胃上皮細胞系中CDX2和VIL1的表達;2、HpS

6、lyD能夠誘導人胃上皮細胞系TCTP的表達;3、HpSlyD誘導的CDX2和VIL1表達能夠通過下調TCTP表達而被抑制;4、TCTP過表達能夠上調CDX2和VIL1表達;5、HpSlyD結合蛋白FK506能夠阻斷HpSlyD誘導的CDX2、VIL1和TCTP表達;6、在IM-GA和GC中，HpslyD陽性菌株感染與CDX2和TCTP表達相關;7、隨著胃疾病發展GS-IM-GA-GC，HpslyD陽性菌株感染促進CDX2和TCTP表達;