鎘誘導下活性氧自由基、細胞內鈣離子和細胞凋亡三者間的關系.pdf

1、本文通過正常細胞(HL-7702)和腫瘤細胞(Raji)的體外實驗，研究鎘誘導下活性氧自由基(ROS)堆積，細胞內鈣離子變化和細胞凋亡之間的關系。細胞凋亡水平通過Hoechst33258染色實驗來檢測。細胞內鈣離子變化和細胞內活性氧自由基堆積分別采用熒光染料Flu-3/AM和DCFH-DA染色后通過流式細胞儀檢測熒光強度來獲得。 在實驗中我們加入了可以專一螯合細胞外鈣離子的EGTA(20mM)和能進入細胞內螫合細胞內鈣離子的B

2、APTA-AM(10μM)處理細胞，以研究在鎘離子誘導下細胞內濃度明顯上升的鈣離子主要來源細胞內還是細胞外；通過加入BAPTA-AM(10gM)和可以清除細胞內ROS的NAC(15mM)后檢測細胞凋亡率變化，以進一步研究細胞內鈣離子和ROS堆積在細胞凋亡途徑中的作用。 本實驗結果發現HL-7702和Raji細胞在用鎘處理以后細胞凋亡率會明顯上升，在提高了細胞凋亡水平的同時，細胞內鈣離子濃度和ROS堆積也明顯增加。當細胞內鈣離子

3、和ROS被清除以后，細胞凋亡率也顯著下降。BAMTA/AM可以降低了由鎘誘導產生的細胞鈣離子升高(P<0.001)，ROS積累增加(P<0.001)和細胞凋亡水平升高(P<0.001)等效應。EGTA可以降低了由鎘離子誘導產生的細胞內鈣離子升高(P<0.01)，ROS積累增加(P<0.001)但是不能降低細胞凋亡水平。以上結果證明了由鎘誘導的細胞內鈣離子上升的鈣離子主要來源細胞內(HL-7702細胞中約占78％，Raji細胞中約占59％

4、)，另外少部分來源細胞外。實驗結果同時顯示，在鎘離子的誘導下細胞凋亡和ROS堆積(HL-7702細胞中r=0.8781；Raji細胞中r=0.6919)和細胞內鈣離子濃度上升(HL-7702細胞中r=0.9073；Raji細胞中r=0.8692)均呈顯著正相關。而ROS堆積和細胞內鈣離子濃度上升也呈顯著jF相關(HI-7702細胞中r=0.8619；Raji細胞中r=0.9061)。 通過本實驗我們可以得出兩個結論：1)在鎘離